Noviocell NCS01操作說(shuō)明書(shū)

syntrix-P kit

Quantity: 10 ml 
Catalog number: NCS01

Syntrix-P是一種合成基質(zhì)，可用于為各種基于細(xì)胞的測(cè)定法創(chuàng)建定義的3D微環(huán)境。Syntrix-P已被低聚乙二醇部分官能化，從而為細(xì)胞提供了低粘附力的表面。

描述

syntrix-p試劑盒使用指南

syntrix-p是一種合成基質(zhì)，可用于為各種基于細(xì)胞的分析創(chuàng)建定義的三維微環(huán)境。syntrix-p已被低聚乙二醇部分功能化，從而呈現(xiàn)出與細(xì)胞的低粘附表面。在細(xì)胞培養(yǎng)基存在下，syntrix-p自組裝成水凝膠，水凝膠呈現(xiàn)納米纖維結(jié)構(gòu)，類似于天然的細(xì)胞外基質(zhì)。已發(fā)現(xiàn)所得水凝膠支持各種細(xì)胞系（如3T3、HepG2、MDCK和CaCO-2）和原代細(xì)胞（如HUVEC、HADSC和HESC）。

工具包內(nèi)容

Syntrix-P Kit                                                                     Amount

Syntrix-P (Solution A)*                                                   2 x 1.65 mL

Hyaluronic acid (Solution B)*                                          1 x 1.5 mL *

Store at -20o C

一般考慮

•仔細(xì)檢查解凍溶液A后是否有任何沉淀。如有必要，通過(guò)上下數(shù)次移液管重新溶解任何沉淀。

•解凍后，取適當(dāng)體積的等分溶液A，以避免多次凍融循環(huán)。此外，將溶液A在室溫下的時(shí)間保持在低限度，即在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)后立即將其放回-20°C。

•syntrix-p可用于3-9mg/ml的終基質(zhì)濃度范圍。

表1中的體積導(dǎo)致終的基質(zhì)濃度為5 mg/ml，為特定應(yīng)用的優(yōu)化提供了良好的起點(diǎn)。由于不同的細(xì)胞類型可能需要不同的濃度，我們參考了文件協(xié)議中其他濃度所需的體積

•當(dāng)在96孔板1 syntrix-p試劑盒中以5 mg/ml的濃度和每孔60微升的體積使用時(shí)，可為約2.5個(gè)96孔板提供足夠的基質(zhì)。

•Syntrix-P溶液呈酸性（pH 2-2.5）。包封后，凝膠的ph值將在6.5-7.5之間。ph值隨后將與添加的介質(zhì)平衡

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)基中存在的緩沖液中和SyTrIX-P的凝膠化，并在混合時(shí)立即開(kāi)始。因此，“細(xì)胞懸浮液+溶液B”與“SyTrIX-P”（溶液A）的混合是非常重要的，但要快速而小心地進(jìn)行（避免引入氣泡）。我們建議在混合時(shí)直接開(kāi)始電鍍，因?yàn)椴糠中纬傻哪z的破壞會(huì)對(duì)終凝膠完整性產(chǎn)生負(fù)面影響。

•細(xì)胞在syntrix-p中培養(yǎng)，濃度范圍為4*104-2.5*107細(xì)胞/ml。需要滴定法來(lái)確定實(shí)驗(yàn)的宜細(xì)胞密度。

高通量實(shí)驗(yàn)的一個(gè)很好的起點(diǎn)是以每毫升凝膠4*104–2*105個(gè)細(xì)胞的密度對(duì)細(xì)胞進(jìn)行平板化。

•在電鍍后的0.5-2小時(shí)內(nèi)，使用帶有酚紅pH指示器的細(xì)胞培養(yǎng)基制備的基質(zhì)將顏色從三文魚(yú)色變?yōu)闇\粉色。syntrix-p與所有標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基兼容。

•重要的是盡量減少氣泡的形成，因?yàn)榻K凝膠中存在氣泡會(huì)干擾氣泡與井的連接。

•為了填充更多的井，建議使用多通道吸管。

•Syntrix-P矩陣隨著時(shí)間的推移透明度增加。為了獲得更高的光學(xué)透明度，使用較低的凝膠體積，因?yàn)檫@將降低凝膠的光吸收率。

•syntrix-p是一種*定義的合成基質(zhì)，與基底膜提取物相比，不含可溶性生長(zhǎng)因子或細(xì)胞因子。為了獲得宜的細(xì)胞生長(zhǎng)和分化，可能需要向培養(yǎng)基中添加生物活性分子（如生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子等）。