SNP Pol DNA 聚合酶可輕松、可靠和快速地特異性區(qū)分等位基因，例如 B. 使用 CRISPR/Cas9 設定點突變，檢測錯誤的 CRISPR/Cas9 產(chǎn)品或驗證測序結(jié)果。SNP Pol DNA 聚合酶高度特異性地識別引物-模板復合物是否錯配。錯配（點突變）必須位于引物的 3' 端。因此，突變等位基因可以與野生型等位基因*區(qū)分開來——無需測序，因為聚合酶在錯配的情況下根本不會擴增。

只需將引物放在假定的點突變上（重要提示：點突變必須位于 3' 末端），聚合酶將以 * 的準確度檢測該區(qū)域的錯配：如果堿基與引物的 3' 末端互補在 DNA 上 - 鏈顯示突變而引物沒有，則不會發(fā)生擴增 - 快速 * 確定！
因此，SNP Pol DNA 聚合酶可用于以簡單、省時且經(jīng)濟高效的方式篩選點突變。

變體SNP PolTaq DNA 聚合酶 >具有 5'-3' 核酸酶活性，因此可以與特定的引物探針一起使用，例如 Taqman® 探針或分子信標。

以*提供一次性測試樣品。在德國境內(nèi)運送時無運費！測試樣品價格將在產(chǎn)品正式訂購時退還。

描述
SNP Pol DNA 聚合酶（單核苷酸的高區(qū)分度）) 是一種高度選擇性的 DNA 聚合酶。專為等位基因特異性鑒別而開發(fā)，需要非常高的鑒別率（high discriction）：例如用于等位基因特異性PCR（ASA；AS-PCR）、等位基因特異性引物延伸（AS-PEX）、SNP分析、基因分型或甲基化特異性 PCR (MSP)。許多 DNA 聚合酶耐受錯配的引物-模板復合物。另一方面，SNP Pol DNA 聚合酶可以特異性地區(qū)分它們（高度區(qū)分），并且只提供具有匹配引物對的靶向 PCR 產(chǎn)物！Genaxxon SNP Pol 和 SNP PolTaq DNA 聚合酶使用等位基因特異性 PCR 可以高達 * 區(qū)分兩個等位基因，并且在簡單的 qPCR 之后，可以清楚地說明存在哪些等位基因。

使用等位基因特異性 PCR，可以量化野生型序列池或背景中的突變率。NGS確定的突變頻率也可以使用等位基因特異性 PCR 和 SNP Pol DNA 聚合酶進行驗證。SNP PolTaq DNA 聚合酶非常適合分析液體活檢樣本。有了它，可以很好地分析和量化癌癥突變的存在和頻率。

圖片： SNP Pol DNA聚合酶的應用實例

我們建議使用短擴增子（約 60-200 bp）的引物以獲得最佳結(jié)果。更長的擴增子也是可能的。
在較長的擴增子 >500 bp 的情況下，可能需要添加鎂 (+0.5 - 1.5mM)。

故障排除：
PCR 30 個循環(huán)后沒有條帶！
缺失或弱波段情況下的優(yōu)化過程

- 實時 PCR 方法
- 檢查 dNTP 濃度。這應該在 200 到 300 µM 之間（在 PCR 中）。
- 增加循環(huán)次數(shù)（至少 35，最好等于 40）

測試優(yōu)化 -
循環(huán)次數(shù) 在終點檢測中，30 次循環(huán)并不總是足以生成清晰可見的條帶。例如，如果基線少于 200 個 DNA 拷貝。因此，測試應使用實時 PCR 運行，或設置五個平行 PCR，其中一個在五個不同循環(huán)后從 PCR 設備中移除（示例如下）。

終點檢測：
與 SNP Pol DNA 聚合酶平行設置五個相同的 PCR 反應。
在 20、25、30、35 和 40 個循環(huán)時，從循環(huán)儀中取出一個 PCR 管，最后將所有五個反應加載到瓊脂糖凝膠上。
這可以很容易地查看針對給定應用（起始材料、目標、引物）的 PCR 中的最佳循環(huán)數(shù)。

使用細胞裂解物的 SNP Pol PCR
動物細胞和大腸桿菌可直接用于使用 SNP Pol DNA 聚合酶的 PCR！不需要單獨的裂解或蛋白酶 K 消化。
程序 PCR 方法：

1. 每批 PCR 需要 50 - 500 個細胞！
2. 用引物和緩沖液制備 PCR 混合物并放在冰上！
3. 將挑取的菌落直接放入 10-20µL 水中（無需單獨裂解，無需蛋白酶 K 消化），
短暫渦旋（5 秒），然后將此細胞懸液直接加入 PCR 反應混合物中，例如
用于 PCR 的 10µL 細胞懸液 -接近 20µL 總體積。初始變性時間2-3分鐘
即可，必要時可延長至5分鐘。
每個反應最多 100 個拷貝的基因組 DNA 相對較低，但應該仍然有效。
這種細胞懸液的其余部分也可以冷凍起來進行進一步測試。

可選：
4. 如果可能：進行實時 PCR！

SNP Pol DNA 聚合酶(M3009 >)或(M3061 >)可與非特異性熒光染料（例如來自 Genaxxon 或 SybrGreen® 的Green DNA Dye >）一起用于實時 PCR。當使用特定的 PCR 探針時，只能使用 SNP PolTaq DNA 聚合酶，因為只有它具有 5'-3' 外切核酸酶活性。

憑借我們的高品質(zhì)dNTP 作為一組（M3015.4100 和 M3015.0250）>或作為混合物（M3016.1010）>或我們的DNA 標記 >和我們廉價的標準瓊脂糖 >我們?yōu)槟峁└嘤糜?PCR 的產(chǎn)品。

SNP Pol DNA 聚合酶的應用領(lǐng)域
- 點突變的監(jiān)測、驗證和檢測
- 識別正確或錯誤的 CRISPR/Cas9 產(chǎn)品
- 測序結(jié)果的驗證/驗證
- 突變的量化（例如 NGS 結(jié)果）
- 通過等位基因檢測 SNP-特異性擴增 (ASA) / 等位基因特異性 PCR
- 亞硫酸氫鹽處理的 DNA（CpG 甲基化側(cè)）后的甲基化特異性 PCR (MSP)
- HLA 基因分型
- 微測序
- 使用水解探針的實時 PCR
- 實時多重 PCR

-秀麗隱桿線蟲中的 DamID-seq 數(shù)據(jù)。

Sharma R、Ritler D、Meister P.
秀麗隱桿線蟲發(fā)育過程中核組織 DNA 腺嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶鑒定分析工具。創(chuàng)世紀。2016 年 2 月 4 日。doi：10.1002/dvg.22925。

- 使用 SNPase DNA 聚合酶進行微測序 SNP 基因分型可以通過以下所述的程序進行：

Lovmar L、Fredriksson M、Liljedahl U、Sigurdsson S、Syvänen AC。
通過微測序和微陣列進行的定量評估揭示了全基因組擴增 DNA 的準確多重 SNP 基因分型。核酸研究 2003；31:e129 。

- HiDi DNA 聚合酶的等位基因特異性錯配選擇性

Drum M、Kranaster R、Ewald C、Blasczyk R、Marx A (2014) 水生棲熱菌 DNA 聚合酶的變體在等位基因和甲基化特異性擴增中的應用具有更高的選擇性。公共科學圖書館一號 9(5)：e96640。doi:10.1371/journal.pone.0096640