支原體是小的原核生物，它們太小而無法在顯微鏡下看到，并且不能被普通抗生素試劑消除。支原體可能會影響細(xì)胞系的細(xì)胞生長、增殖和形態(tài)，從而可能導(dǎo)致不可靠的實驗結(jié)果。大約 15% 到 35% 的實驗室細(xì)胞培養(yǎng)物被支原體污染。因此，建議經(jīng)常控制以保證無支原體的環(huán)境。 

分析方法

CLS 提供支原體檢測的短期和長期測試。在前者中，樣品在到達(dá)后立即進(jìn)行測試，而在后者中，開始細(xì)胞培養(yǎng)并在無抗生素培養(yǎng) 14 天后對細(xì)胞進(jìn)行測試。支原體檢測是使用兩點檢測系統(tǒng)進(jìn)行的，該系統(tǒng)包括 PlasmoTest™ - 支原體檢測試劑盒 (Invivogen) 和 Certus QC - mycoADVANCED 檢測試劑盒 (Certus)。

比色報告基因測定

該測試是基于細(xì)胞的比色測定。在支原體存在的情況下，報告細(xì)胞系會誘導(dǎo)信號級聯(lián)反應(yīng)，從而觸發(fā)培養(yǎng)基中的顏色從紅色變?yōu)樗{(lán)色。該測定在 96 孔多孔板中進(jìn)行。在微孔板分光光度計中檢測 620-655 nm 的信號。檢測到所有支原體和膽原體物種，以及細(xì)胞培養(yǎng)物中的其他污染物，例如細(xì)菌。結(jié)果顯示在下面的條形圖中：

等溫擴(kuò)增

等溫擴(kuò)增是一種基于支原體特異性 DNA 的等溫擴(kuò)增與使用 DNA 嵌入染料的實時檢測相結(jié)合的快速且可靠的測試。該測定法可以檢測出占污染 >95% 的六種常見的物種：口腔分枝桿菌、豬鼻分枝桿菌、精氨酸分枝桿菌、發(fā)酵分枝桿菌、人型分枝桿菌和萊氏分枝桿菌。由于序列同源性，還將檢測到其他支原體物種（肺炎支原體、雞毒支原體和滑膜支原體）。為了確定樣品是支原體陽性還是陰性，需要研究解鏈溫度 (Tm)。不同熔化溫度的結(jié)果如下所示： 

等溫擴(kuò)增結(jié)果的評估

所有熔化溫度及其各自的測試結(jié)果解釋如下：

比色報告分析結(jié)果的評估

如果測試呈陽性，則存在 5*10 2 – 5*10 5范圍內(nèi)的菌落形成單位 (CFU) 。不同支原體種類的 CFU/ml 詳細(xì)列表如下所示：